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PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶原因與對(duì)策
  • 發(fā)布日期:2023-06-12      瀏覽次數(shù):861
    • PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致,或大或小,或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn),其原因:

      1、引物與靶序列不wan全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。

      2、Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。其次,是酶的質(zhì)和量,往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn),酶的量過多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。

      其對(duì)策有:

      ①必要時(shí),重新設(shè)計(jì)引物。

      ②減低酶的量或調(diào)換另一來源的酶。

      ③降低引物量,適當(dāng)增加模板量,減少循環(huán)次數(shù)。

      ④適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法(93℃變性,65℃左右退火與延伸,也叫兩步法)。

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